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注射AAV病毒后的表达周期如下： 1.开始表达时间：AAV注射动物后，一般在1-2周左右开始表达。 2.表达持续时间：AAV表达时间比较持久，体内实验建议在感染后3-4周后进行第一次观察。不同组织器官的细胞分裂更新水平不同，AAV表达时间也会有差异。 3.持续表达时间：AAV可以保持基因长期转录表达，在体内表达一般在3～4周可以达到高峰随后持续表达，作用时间＞5个月，甚至有临床实验2年后仍可以检测到其表达。...

在选择腺相关病毒（AAV）、慢病毒和腺病毒作为基因治疗载体时，需要考虑以下几个关键因素： 1、基因组类型和大小： AAV：单链DNA病毒，基因组大小约4.7kb，包装容量约4.5kb。 慢病毒：RNA病毒，基因组大小约9kb，包装容量约6kb。 腺病毒：双链DNA病毒，基因组大小38-39kb，包装容量约7.5kb。 2、感染细胞类型： AAV、慢病毒和腺病毒均能感染分裂和非分裂细胞。 3、整合至宿主基因组： AAV和腺病毒：非整合性载体，降低插入突变风险。 慢病毒：整合性载体，适合需要长期稳定表达的基因治疗。...

质粒载体和慢病毒载体是两种常用的基因转移工具，它们在基因治疗和基因功能研究中扮演着重要的角色。以下是它们之间的一些主要区别： 1、性质和来源： 质粒载体：质粒是一种小型的、通常是环状的DNA分子，可以在细菌中独立于细菌的染色体复制。质粒载体是经过改造的质粒，用于在细菌和真核细胞中克隆和表达外源基因。 慢病毒载体：慢病毒载体是基于人类免疫缺陷病毒（HIV）改造的病毒载体，它能够将外源基因有效地整合到宿主细胞的基因组中。 2、整合能力：...

不同温度对AAV病毒保存效果的影响如下： 常温保存：AAV病毒在常温（20-25°C）下的稳定性较差，更适合在低温条件下保存。病毒浓度越高，在常温下的存储时效性可能相对较长。使用适当的缓冲液和添加保护剂（如甘油或蔗糖）可以提高AAV病毒在常温下的稳定性。 4°C短期保存：如果在短时间内（3天内）将使用AAV病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4°C保存。病毒当天未用完但明天会接着用，可直接4°C保存过夜，因为-80°C保存会增加冻融次数严重影响AAV滴度。...

腺相关病毒（AAV）的保存期限和条件如下： 1、短期保存：如果在短时间内（3天内）将使用AAV病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4℃保存。 2、长期保存：对于长期保存，建议将AAV病毒放置于-80℃冰箱保存，可以存放6个月以上。如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前重新测定病毒滴度。 3、反复冻融的影响：每冻融一次，病毒滴度降低10%左右，因此应尽量避免反复冻融。为避免反复冻融，建议收到病毒后按照每次的使用量进行分装，然后冻存。...

慢病毒包装第三代系统，也称为四质粒系统，是在第二代慢病毒包装系统（三质粒系统）的基础上发展起来的，主要目的是为了提高安全性。 以下是第三代慢病毒包装系统的一些关键特点： 1、组成：第三代慢病毒包装系统包含四个质粒，分别是： 转移质粒（Transfer Plasmid）：包含目的序列，两侧有LTR，有助于整合到宿主基因组上。 包装质粒（Packaging Plasmid）：编码病毒的核心蛋白、复制所需的酶和基因表达调节因子等。在第三代系统中，这个质粒被进一步拆分为两个质粒，一个编码gag和pol，另一个编码rev。...

关于AAV病毒滴度与三质粒比例关联的参考文献信息： 1、《Biotechnology Journal》：一项发表在《Biotechnology Journal》上的研究通过实验设计（DoE）优化了转染至HEK293细胞的三种质粒（腺病毒辅助质粒（pHelper）、AAVrep/cap质粒（pRepCap）和转基因质粒（pAAV-GOI））的比率，以提高基因组滴度和完整衣壳比率。研究发现，对于AAV2和AAV9，优化后的质粒比例（rAAV2的pHelper:pRep2Cap2:pAAV-GOI =...

腺相关病毒（AAV）载体的类型多样，主要包括以下几种： AAV1：最早被发现和应用的AAV血清型之一，具有较高的递送效率和广泛的组织特异性，被广泛应用于心血管和肌肉系统的基因治疗。 AAV2：被广泛应用于肝脏、眼部和肺部等组织的基因治疗，是最早被应用于眼科基因治疗的AAV血清型。 AAV3：对于神经系统具有较高的递送效率，是神经系统相关疾病的潜在治疗载体。 AAV4：与AAV2相似，但其递送效率较低。 AAV5：对于肺部和肝脏等组织具有较高的递送效率，可用于治疗呼吸道和肝脏相关疾病。 AAV6：对于肌肉组织具有较高的递送效率。...

针对腺相关病毒（AAV）在胰腺的靶向递送，启动子和注射方式的选择是实验成败的关键。以下是一些常见的选择方法和考虑因素： 1. 启动子的选择 选择启动子时，需要考虑目标基因在胰腺特异性细胞（如胰岛β细胞、胰岛α细胞、外分泌细胞等）中的特异性表达： 通用型启动子：如CMV、CAG等可以在许多细胞类型中有效表达，但其在胰腺中的特异性较差，且可能会引发免疫反应。 胰腺特异性启动子： 胰岛素启动子（Insulin promoter, INS）：适用于靶向胰岛β细胞，常用于糖尿病研究。 胰高血糖素启动子（Glucagon...

靶向内耳的AAV血清型有以下几种： AAV1：在新生小鼠内耳基因传递中使用广泛，可转导毛细胞、支持细胞、血管纹、前庭神经上皮等多种细胞类型，通过圆窗膜注射方式可高效转导内毛细胞。 AAV2：虽然全身递送效果有限，但对于内耳的某些类型细胞（如螺旋神经节神经元）具有较好的转导效果，能够通过局部注射到内耳的基底膜窗有效转导内耳细胞。 AAV6：在内耳毛细胞和支持细胞中的表现较为显著，被认为可以较好地靶向这些细胞类型，具有一定的应用潜力。 AAV8：对于内耳毛细胞也具有一定的嗜性，对耳蜗中的毛细胞有较好的转导效果。...