知识分享

Cas9基因敲除是一种基于CRISPR-Cas9系统的基因编辑技术，用于在基因组中精准敲除目标基因。Cas9基因敲除的原理依赖于Cas9核酸酶与向导RNA（sgRNA）的协同作用，能够切割特定的DNA序列，触发细胞修复机制，从而导致基因的功能失效。以下是该技术的具体工作机制和原理： 1. CRISPR-Cas9系统的核心组成 Cas9核酸酶：CRISPR系统中的关键酶，能够在目标DNA序列的特定位置引发双链断裂（Double-Strand Break，DSB）。 单链向导RNA（sgRNA）：向导RNA由CRISPR...

慢病毒载体常用于基因治疗、基因编辑、基因功能研究等领域，尤其是在需要长期稳定的基因表达或基因敲除的情况下。 具体选用慢病毒载体的情况包括： 长期基因表达： 慢病毒可以将外源基因整合到宿主细胞基因组中，因此适用于需要长期稳定表达的实验或治疗。尤其适合研究那些需要长期追踪的基因功能。 难以转染的细胞类型： 慢病毒能有效感染多种细胞类型，包括分裂活跃和不活跃的细胞（如神经元、干细胞和原代细胞），这是传统转染方法难以实现的。 基因敲除或基因沉默：...

慢病毒载体的主要优势在于其能够提供长期稳定的基因表达、广泛的细胞感染能力以及较低的免疫反应，使其在基因治疗和基因研究中具有广泛的应用价值 一、特点： 基因组整合： 慢病毒载体能够将外源基因整合到宿主细胞的基因组中，从而实现长期的基因表达。不同于其他一些病毒载体，慢病毒在细胞分裂过程中仍然保持基因的稳定传递。 感染分裂和不分裂细胞： 慢病毒载体能够有效感染分裂活跃的细胞和不分裂的细胞（如神经元、肝细胞等），因此适用于研究多种细胞类型。 相对较大的载体容量： 慢病毒载体能够携带大约8-10...

什么是慢病毒 慢病毒是以HIV-1为基础改造而来的一种病毒载体。在数十年的应用中，慢病毒载体的生物安全性和有效性不断被提升，目前已经成为体内外生物实验中一种功能非常强大的基因递送工具。 在基因递送方面，慢病毒载体拥有诸多独特的优势：稳定持久表达、可感染多种类型细胞、可携带大片段基因、免疫原性比较低等。无论是基础科研还是临床应用，慢病毒载体都具有非常广泛的应用前景。 慢病毒的应用场景 目前慢病毒载体主要应用在以下几个方面： 细胞基因治疗（已上市的CAR-T产品有9款采用了慢病毒载体递送CAR基因）...

什么是慢病毒 慢病毒是以HIV-1为基础改造而来的一种病毒载体。在数十年的应用中，慢病毒载体的生物安全性和有效性不断被提升，目前已经成为体内外生物实验中一种功能非常强大的基因递送工具。 在基因递送方面，慢病毒载体拥有诸多独特的优势：稳定持久表达、可感染多种类型细胞、可携带大片段基因、免疫原性比较低等。无论是基础科研还是临床应用，慢病毒载体都具有非常广泛的应用前景。 慢病毒的应用场景 目前慢病毒载体主要应用在以下几个方面： 细胞基因治疗（已上市的CAR-T产品有9款采用了慢病毒载体递送CAR基因）...

ITRs（反向末端重复序列）是生产rAAV载体所需的唯一顺式作用元件，它们位于AAV基因组的两侧，是AAV基因组自我复制的起点以及触发病毒包装的信号，在病毒的复制和包装过程中起关键作用。ITR区域的完整性对重组腺相关病毒(rAAV)的生产以及活性至关重要，缺失、突变的ITR可能导致AAV病毒产量及活性降低。本文从ITR序列结构，其在基因组复制及表达中的作用以及ITR突变、缺失对AAV的影响等方面介绍ITR基础知识，同时回顾了目前已上市AAV基因治疗产品的ITR设计。   ITR 基本结构 AAV2...

慢病毒和腺相关病毒（AAV）在基因治疗中的应用各有不同，它们在基因传递机制、适用性、安全性等方面存在显著差异。以下是两者的详细对比： 特性 慢病毒（Lentivirus） 腺相关病毒（AAV） 基因整合 基因整合到宿主基因组中，提供长期稳定表达 基本不整合到基因组，形成独立的环状DNA（episome）长期表达 基因表达持续性 长期稳定表达，适用于需要持久表达的基因治疗 长期表达，尤其适合非分裂细胞，但通常不如慢病毒稳定 载量 载量中等，约8 kb 载量较小，约4.7 kb 感染细胞类型 可感染分裂和非分裂细胞，适用广泛...

质粒（Plasmid）在基因治疗中起着重要的作用，作为携带和传递目标基因的载体。基因治疗的目标是修复、替换或调控患者体内的基因表达，从而治疗遗传性疾病或其他疾病。质粒在这一过程中充当基因传递系统的一部分，具体作用如下： 基因载体 质粒是一种小型环状DNA分子，能够自我复制。在基因治疗中，科学家们将目标基因（如健康基因或具有治疗作用的基因）插入质粒中，然后利用该质粒作为载体，将这些基因导入患者细胞中。 携带治疗基因...

肺部的AAV基因治疗涉及选择合适的给药方式和血清型，以确保有效的基因转导。由于肺部的复杂结构和广泛的气道分布，选择合适的注射方式至关重要。 给药方式上,气管内滴注和喷雾吸入是最常用于肺部的AAV给药方式，能够有效地靶向肺部气道上皮细胞。局部给药（如气管内滴注和鼻内滴注）较适合肺部靶向性治疗，而静脉注射则适用于全身治疗，但靶向性较差。...

肾脏的AAV基因治疗需要选择合适的给药方式和血清型。肾脏因其复杂的结构和功能，在AAV的选择上也有独特的要求 局部给药（如肾动脉注射或肾包内注射）适合肾脏的靶向基因治疗，能够减少全身性副作用。系统性给药适用于研究全身影响，但靶向性较差。 在血清型选择上，AAV9在肾脏中具有较好的转导效率，AAVrh10对肾脏上皮细胞的转导表现较好，AAV2和AAV8也是常用的选择，但转导效率相对较低。 1、肾脏AAV给药方式 给药方式 途径 优点 缺点 系统性给药 静脉注射（尾静脉或外周静脉） 操作简单，适合全身分布，便于研究全身影响...