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腺相关病毒(Adeno-associated virus, AAV)载体在基因治疗领域占有举足轻重的地位，因其传染性小、免疫反应低和转导多种组织的能力强而成为候选的基因治疗载体之一。AAV开发工艺的关键步骤包括载体设计、生产、纯化和品质控制等，为了精确地开发出用于疾病治疗或研究的AAV载体，下面介绍了该过程的关键环节： 1. 载体设计和克隆： AAV载体设计的首要任务是构建重组AAV质粒，包含目标基因、控制表达的启动子、poly-A信号以及AAV的反向终止重复序列(ITRs)-...

在疾病模型研究和基因治疗领域，通过shRNA介导的RNA干扰技术已经成为一种有效的遗传操作方法。更具体地说，在哺乳动物细胞中，腺相关病毒(AAV)载体因其稳定的基因表达、低免疫原性及广泛的感染范围而广受欢迎。构建哺乳动物shRNA干扰AAV载体的详细过程，如下所述： 1. 目标基因的选择和shRNA设计： 首先，确定欲沉默的目标基因，并设计合适的shRNA序列。选择有效且特异性高的shRNA至关重要，通常需要通过生物信息学预测工具挑选合适的靶序列，并尽量避免靶向非目标的mRNA。 2. shRNA序列的合成和克隆：...

微RNA(miRNA)是一类非编码的短链RNA分子，对于调控基因表达起着关键作用。它们可通过绑定到靶mRNA的3’非编码区域(3’ UTR)，从而抑制其转录或降解mRNA。AAV(腺相关病毒)和逆转录病毒(如慢病毒，Lentivirus)因其高效的基因输送能力和长期的基因表达，成为介导miRNA过表达或干扰的理想工具。以下是通过这些病毒载体进行miRNA过表达和干扰构建的关键步骤： 1. miRNA的选择与设计：...

RNA干扰(RNAi)是一种在生物学中广泛存在的内源性基因沉默机制，通过特定的小分子RNA(如小干扰RNA，siRNA;或短发夹RNA，shRNA)介导，降低或抑制目标基因的表达水平。为了在实验室或临床中利用这一机制进行基因表达调控，需要构建有效的RNA干扰载体。该载体通常是一个质粒或病毒载体，用于导入、产生和加工成具有RNA干扰功能的RNA分子。以下是构建RNA干扰载体的标准流程： 1. 目标基因的选择与设计：...

基因治疗病毒载体的构建是21世纪医学研究中的一个突出成就，它打开了全新的治疗大门，特别是对于先天性遗传疾病和一些难以治疗的疾病。这一技术的关键在于利用病毒载体传达改良或替换的基因到体内特定细胞中，以修复或替代异常的基因。构建一个安全而且有效的病毒载体涉及到以下几个重要的步骤： 1. 选择合适的病毒载体： 选择正确的病毒载体对于成功的基因治疗至关重要。常用的载体包括腺病毒(Adenovirus)、腺相关病毒(Adeno-associated virus,...

在生物技术和医学研究领域，基因治疗是一个极具潜力的分支，它通过修正或替换异常基因来治疗疾病。腺相关病毒(AAV)因其安全性高、感染性范围广和基因表达稳定等优点成为基因治病和基因干扰研究中的重要工具。构建有效的AAV干扰质粒是开展这类研究的关键。以下是关于AAV干扰质粒构建的最新进展和实用指南。 首先，AAV干扰质粒是指运用AAV作为载体，携带干扰RNA(如小干扰RNA，siRNA或者短发夹RNA，shRNA)等基因构建的表达质粒。这种质粒在细胞内可抑制特定基因的表达，用于研究基因功能或作为潜在的治疗手段。...

腺相关病毒(Adeno-associated virus, AAV)载体因其安全性和高效性而被广泛用作基因疗法的工具。然而，为了提高疗效与靶向性，需要对AAV载体进行质量控制与结构优化。这篇文章关注于AAV载体的质量检测方法和结构优化策略，旨在帮助研究者和开发者提高AAV介导的基因递送系统的性能。 AAV载体质量检测： 为了确保AAV载体的安全性和功效，必须对其进行严格的质量检测，常用的检测内容和方法包括： 物理粒子计数：使用纳米粒子跟踪分析(NTA)或电子显微镜(EM)确定AAV制备的物理粒子浓度。...

随着生物技术的快速发展，特别是在基因治疗领域，AAV(腺相关病毒)向成为一种极具潜力的载体用于送递遗传物质到特定细胞中。AAV干扰质粒(Plasmid)则是在AAV系统中用于沉默目标基因表达的一种工具，它结合了AAV的高效送递能力和RNA干扰(RNAi)技术的精确性，提供了一种动态和可控的方法来剖析和调控基因功能。 AAV干扰质粒构建是一个精细的过程，它需要一个优化的设计以确保最大的干扰效果和最小的非特异性影响。以下是构建AAV干扰质粒的基本步骤以及它们在基因沉默中应用的简介。 构建AAV干扰质粒的基本步骤：...

CRISPR/Cas9技术是一项革命性的生物技术，它自2012年被科学家Jennifer Doudna和Emmanuelle Charpentier介绍以来，一直在引领基因工程的发展。这种技术源自细菌的免疫系统，能够精确地剪切和修改DNA序列，就像文字处理软件中编辑文本一样。 CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic...

CRISPR/Cas9载体构建是获取特定的基因编辑工具的关键过程。以下是详细的步骤和过程，将展示如何构建CRISPR/Cas9载体用于基因编辑实验。 1. 设计目标特异性的gRNA 确定靶基因：首先，选择一个你想要编辑的基因作为靶标。 选择靶序列：在所选基因中选择一个20nt(核苷酸)的特异性序列，作为gRNA的靶向序列。该序列靠近3’端需要有一个NGG序列(即PAM序列，Protospacer Adjacent Motif)。...