AAV(腺相关病毒)反复冻融确实会产生不利影响,主要体现在以下几个方面:
1. 病毒滴度降低
每次冻融过程会导致AAV病毒滴度降低约10%左右。这是因为冻融过程会对病毒的蛋白质外壳和基因组DNA造成损伤,降低其完整性和感染能力。
2. 基因组DNA泄漏
研究发现,反复冻融会导致AAV病毒颗粒中的基因组DNA泄漏,表现为游离单链DNA(ssDNA)的显著增加。这种泄漏会进一步降低病毒的转导效率。
3. 转导效率下降
反复冻融会降低AAV的转导效率,即病毒将外源基因导入宿主细胞的能力会减弱。这可能与病毒外壳的损伤和基因组DNA的完整性受损有关。
4. 病毒颗粒降解
冻融过程中,AAV病毒颗粒可能会发生降解,导致其物理和化学性质发生变化。这种降解会影响病毒的稳定性和功能。
5. 稳定性降低
AAV病毒在反复冻融后,其整体稳定性会下降,尤其是在极端温度条件下(如高温或低温)。这可能需要额外的保护措施(如添加稳定剂)来维持其活性。
建议:
1.尽量避免反复冻融:为了避免反复冻融对AAV的影响,建议在收到病毒后按照每次使用量进行分装,并保存于-80℃。如果需要稀释,应在冰浴中融化后进行操作,并尽快使用。
2.验证感染效率:如果AAV已经经历了多次冻融,建议通过qPCR、感染实验或ELISA等手段检测其滴度或生物学活性。