知识分享

在慢病毒（Lentivirus）包装过程中，常见的污染包括以下几类： 1. 细菌污染 主要来源：操作环境不洁、试剂污染或细胞培养过程中感染。 影响：导致细胞死亡、病毒滴度下降，甚至影响实验结果。 2. 支原体污染 主要来源：长期培养的细胞、受污染的血清或试剂。 影响：支原体可改变细胞生理状态，影响慢病毒的表达和滴度。 3. 内毒素污染 主要来源：使用了受污染的大肠杆菌裂解产物（如质粒提取物）。 影响：内毒素会影响转染效率，甚至在动物实验中引起免疫反应。 4. 噬菌体污染 主要来源：受噬菌体感染的实验室试剂或细菌培养系统。...

在腺相关病毒（AAV）包装过程中，常见的污染主要包括以下几类： 1. 宿主细胞来源的污染 宿主细胞DNA：包装过程中，293T或其他生产细胞的基因组DNA可能会残留在最终的AAV制品中。 宿主细胞蛋白（HCPs）：细胞裂解时释放的蛋白质，可能引发免疫反应或影响AAV纯度。 2. 质粒相关污染 残余质粒DNA：用于AAV生产的质粒未完全降解，会影响纯度。 内毒素（Endotoxin）：细菌来源的质粒提取过程中可能带入内毒素，影响生物安全性。 3. 空/杂包颗粒 空壳病毒（Empty...

1. 衣壳血清型和工程改造 AAV有多种天然血清型（如AAV1-AAV9），它们各自具有不同的组织嗜性（tropism），即对不同组织或器官的优先感染能力。例如： AAV9：可跨越血脑屏障，高效感染中枢神经系统（CNS）和心脏。 AAV8：高效感染肝脏。 AAV1：对骨骼肌具有较强的亲和力。 此外，衣壳工程改造（如点突变、基因拼接或嵌合AAV）可以优化病毒的靶向能力，使其更专一地感染特定器官。例如，PHP.B、PHP.eB是改造版AAV，能更高效地穿透血脑屏障感染小鼠大脑。 2. 启动子选择...

AAV（腺相关病毒）保存于 -80°C 时通常不需要液氮速冻。以下是标准的 AAV 保存和冻存步骤： 1、直接存入 -80°C AAV 病毒颗粒通常可以直接置于 -80°C 冰箱 中长期存储，无需额外的液氮速冻步骤。 避免反复冻融，以减少病毒活性损失。建议等分后存储。 2、液氮速冻的适用情况 一些研究人员选择在 -80°C 冷冻前 先使用 液氮速冻（即液氮中快速冷冻几秒钟，然后转移到 -80°C），但这并非必须。 长期保存：若需保存数年，液氮（-196°C）是更好的选择。...

AAV（腺相关病毒）纯化是基因治疗和基因传递研究中的关键步骤，具有重要的必要性，主要体现在以下几个方面： 1. 提高载体纯度，降低毒性 AAV制备过程中通常会混入宿主细胞蛋白、核酸、空壳病毒、内毒素等杂质。未经纯化的AAV可能引起免疫反应或细胞毒性，从而影响安全性。高纯度的AAV能有效减少这些风险，提高临床应用的可行性。 2. 增强基因递送效率 AAV载体的感染效率受病毒颗粒的纯度和完整性影响。纯化过程中去除空壳病毒，确保有效载荷的病毒比例，提高基因递送的效率，减少治疗剂量需求。 3. 符合药物生产标准，确保一致性...

腺相关病毒（AAV）作为一种重要的基因治疗载体，其纯化方法对产品质量和应用效果至关重要。以下是几种常见的AAV病毒纯化方法及其特点： 1. 密度梯度超速离心法 原理：利用AAV病毒颗粒在密度梯度（如氯化铯）中的沉降差异，分离出完整的病毒颗粒。 优点：能够有效分离出完整的病毒颗粒，纯度较高。 缺点：需要专业设备，操作复杂，时间长，且难以大规模生产。 2. 亲和层析法 原理：利用特异性配体与AAV结合，通过亲和层析柱进行纯化。 优点：纯化效率高，特异性强，适合多种AAV血清型。 缺点：成本较高，且可能需要优化配体以适应不同血清型。...

腺相关病毒（AAV）在动物体内的表达持续时间主要取决于以下因素： 1.靶细胞类型 非分裂细胞（如肌肉、神经元、肝细胞）：AAV能够长期维持表达，通常可持续数月至数年。 分裂细胞（如骨髓、上皮细胞）：由于细胞分裂会稀释或丢失AAV基因组，表达时间相对较短，可能几周至几个月。 2.AAV血清型 不同的AAV血清型（如AAV1、AAV2、AAV8、AAV9）具有不同的组织亲和性和表达稳定性。例如，AAV9在神经系统中的表达可持续多年，而AAV8在肝脏中的表达通常能维持6个月至数年（具体取决于动物模型）。 3.动物种类...

实现腺相关病毒（AAV）在动物体内的稳定表达需要综合考虑病毒载体设计、递送策略和实验条件优化。以下是基于多篇文献的策略总结： 1. ​血清型选择与组织靶向性 不同AAV血清型对组织的亲和性差异显著，选择合适的血清型是稳定表达的基础： ​AAV9：推荐用于全身广泛表达，其能高效穿透血脑屏障，在脑、心、肝、骨骼肌等多组织中长期表达（注射后9个月仍保持高活性）。 ​特异性血清型：如AAV6靶向肺部，AAV8偏好肝脏，AAV1和AAV7在肌肉中表达较强。需根据目标组织选择血清型以增强感染效率。 2. ​启动子优化...

前言 肌萎缩侧索硬化（ALS）是一种严重的进行性神经退行性疾病，主要累及中枢神经系统中的上、下运动神经元，导致进行性肌肉无力并最终危及生命，其确切致病机制至今尚未完全阐明，但多项研究表明，基因突变（如SOD1、FUS、C9orf72 等）、异常蛋白聚集、兴奋性毒性和神经炎症等因素都可能参与其中。尽管已有如利鲁唑（Riluzole）和依达拉奉（Edaravone）等药物，以及靶向SOD1、TDP-43 等基因的疗法陆续出现，目前仍缺乏从根本上减缓或逆转 ALS 病程的有效手段。...

腺相关病毒（AAV）和慢病毒（LV）在临床应用上的主要区别如下： 1. 应用领域 AAV： 神经系统疾病：AAV因其低免疫原性和对非分裂细胞的高效感染能力，被广泛用于神经退行性疾病（如帕金森病、阿尔茨海默病）和遗传性神经病变的基因治疗。 眼科疾病：AAV在视网膜病变等眼科疾病的基因治疗中表现出色，例如用于治疗Leber先天性黑蒙症。 肌肉疾病：AAV可用于治疗杜氏肌营养不良症等肌肉疾病，因为其能够高效感染肌肉细胞。 全身性疾病：AAV载体可用于治疗一些全身性遗传疾病，如脊髓性肌萎缩症（SMA），通过静脉注射实现全身性基因传递。...