知识分享

当慢病毒的MOI（感染复数）过高时，会对细胞产生多方面的影响，主要包括以下几个方面： 1. 细胞毒性增加 MOI过高意味着细胞暴露于大量病毒颗粒，这会显著增加细胞的代谢负担，导致细胞毒性反应。细胞可能出现生长缓慢、形态异常（如细胞变圆、脱落），甚至死亡。 2. 感染效率可能降低 尽管MOI越高理论上感染的细胞数量可能更多，但过高的MOI可能导致细胞对病毒产生抵抗，反而降低感染效率。此外，细胞在高MOI下可能因毒性反应而无法正常完成感染过程。 3. 基因表达异常...

慢病毒的保存方式取决于保存时间的长短和实验需求，以下是两种常见保存条件的对比： -80℃保存 优点：操作相对简单，实验室中常见的-80℃冰箱即可满足需求。 保存期限：一般可以保存6个月以上，部分文献提到可保存1年。 注意事项：需分装保存，避免反复冻融，每次冻融会降低病毒滴度10%-50%。 液氮保存 优点：保存期限更长，理论上可以长期保存，对病毒活性和滴度的保持效果更好。 缺点：需要液氮罐等设备，操作相对复杂且成本较高，需要定期补充液氮。 注意事项：保存时需使用专用的冷冻管，并确保密封良好，避免液氮泄漏或污染。...

在病毒学中，CG和VG是两种常见的单位，分别表示病毒基因组的拷贝数（Genomic Copies，GC）和病毒基因组拷贝数（Vector Genomes，VG）。它们在数值上是等同的，即： 1 GC/ml = 1 VG/ml 这是因为它们都用于描述每毫升病毒液中病毒基因组的拷贝数量。 换算示例 如果检测到某病毒液的基因组拷贝数为1×10¹² GC/ml，那么其VG/ml的数值也是1×10¹²。 需要注意的是，虽然GC和VG在数值上相等，但它们的侧重点不同： GC/ml...

GMP慢病毒包装和科研级慢病毒包装的主要区别体现在以下几个方面： 1. 质量控制标准 GMP级：GMP（Good Manufacturing Practice）级慢病毒包装遵循严格的生产质量管理规范，符合临床应用的要求。生产过程需要在符合GMP标准的车间内进行，确保病毒载体的质量、安全性和一致性。GMP级病毒包装需要经过全面的质量检测，包括病毒滴度、纯度、活性、无菌性、内毒素水平等，且所有生产过程和检测结果都有详细记录。...

AAV（腺相关病毒）反复冻融确实会产生不利影响，主要体现在以下几个方面： 1. 病毒滴度降低 每次冻融过程会导致AAV病毒滴度降低约10%左右。这是因为冻融过程会对病毒的蛋白质外壳和基因组DNA造成损伤，降低其完整性和感染能力。 2. 基因组DNA泄漏 研究发现，反复冻融会导致AAV病毒颗粒中的基因组DNA泄漏，表现为游离单链DNA（ssDNA）的显著增加。这种泄漏会进一步降低病毒的转导效率。 3. 转导效率下降...

AAV（腺相关病毒）的滴度单位GC（Genomic Copies，基因组拷贝数）和vg/ml（Vector Genomes per milliliter，病毒基因组拷贝数每毫升）是用于描述病毒载体中基因组拷贝数量的两种常见单位。它们的具体含义和关系如下： 1. GC/ml（基因组拷贝数/毫升） 定义：GC/ml表示每毫升病毒液中含有的病毒基因组拷贝总数。 检测方法：通常通过荧光定量PCR（qPCR）或数字PCR（ddPCR）检测。 应用场景：GC/ml主要用于反映病毒液中病毒颗粒的数量，但不区分病毒颗粒是否具有感染能力。...

慢病毒载体在反复冻融时会导致病毒滴度下降，具体的下降幅度取决于以下因素： 1.冻融次数：通常一次冻融可能导致滴度下降约10%-20%，而多次冻融后，病毒的活性可能大幅下降。 2.病毒类型和稳定性：不同慢病毒载体的稳定性差异较大，有些更容易在冻融过程中失活。 3.冷冻和解冻条件：如果冻融过程过于剧烈，例如快速升温或反复震荡，病毒的损伤会更大。 4.保存液成分：使用含有保护剂（如甘油或牛血清白蛋白）可以显著减缓滴度下降。 一般建议 避免多次冻融：将病毒液分装成小体积后再冷冻，避免反复冻融。...

AAV病毒（腺相关病毒）和ADV病毒（腺病毒）是两种常用的病毒载体，在基因治疗和分子生物学研究中都有重要应用。它们各自有不同的特点和优势。以下是AAV病毒相较于ADV病毒的主要优势： 1.安全性 无致病性：迄今从未发现野生型AAV对人体致病，而ADV病毒虽然经过改造降低了致病性，但仍存在一定的风险。...

慢病毒上清一般不能直接使用，通常需要经过处理后才能用于实验，原因如下： 1.病毒浓度较低 慢病毒上清中病毒颗粒的浓度相对较低，直接使用可能无法达到有效的感染效率。通过浓缩处理，如超速离心、PEG浓缩法等，可以提高病毒的浓度，从而增强感染能力。 2.杂质较多 上清中含有大量的细胞碎片、蛋白质等杂质，这些杂质可能会影响病毒感染的效率和细胞的生长状态。例如，细胞碎片可能会在感染过程中堵塞细胞表面的受体，阻碍病毒与细胞的结合；过多的蛋白质杂质可能会干扰病毒的侵入过程，降低感染效率。因此，需要通过过滤、离心等方法去除这些杂质。...

AAV包装上清是需要收集的 病毒颗粒存在 AAV病毒颗粒不仅存在于细胞内，还有一部分会分泌到培养基的上清中。如果只收集细胞而忽略上清，会损失一部分病毒颗粒，从而降低病毒的回收效率和产量。 提高回收效率 同时收集细胞和培养上清液，可以更全面地获取病毒颗粒，提高病毒的回收率，这对于后续的实验或应用来说是非常重要的，能够确保获得足够数量的病毒用于研究或治疗等目的。 具体收集方法 离心收集：在AAV包装和扩增一定时间后，如转染后48-72小时，进行8000rpm离心10分钟，收集含有AAV的上清。...