知识分享

慢病毒包装过程中常见的问题可能包括病毒滴度低、细胞感染效率不高、病毒不稳定以及实验设计问题等。以下是一些具体问题及解决方案： 1. 病毒滴度低 原因分析： （1）转染效率不高。 （2）质粒质量较差（污染、降解等）。 （3）慢病毒元件（如包装质粒和载体质粒）比例不合适。 （4）使用的细胞状态较差（如过于融合或增殖缓慢）。 解决方法： （1）使用高质量的质粒。 （2）选择高效的转染试剂或电转方法，并优化转染条件（细胞密度、DNA用量、转染试剂比例等）。...

腺相关病毒（AAV）包装是基因治疗领域的重要工具，但在实际操作中经常会遇到一些常见问题。以下是一些常见问题及其可能的原因和解决方案： 1. 病毒滴度低 可能原因： （1）病毒颗粒组装效率低。 （2）质粒转染效率不足。 （3）病毒收集或纯化过程中存在损耗。 解决方案： （1）确保使用高质量的质粒。 （2）优化转染条件（如DNA与转染试剂比例、细胞密度等）。 （3）优化病毒纯化流程，避免过度离心或反复冻融。   2.病毒感染效率低 可能原因： （1）病毒滴度不足。 （2）靶细胞对AAV的感染敏感性低。...

过表达慢病毒是一种基因传递工具，用于在细胞或动物体内高效表达目标基因。它的工作原理包括以下几个关键步骤： 1. 慢病毒载体构建 慢病毒是一种改造后的逆转录病毒，通常使用 HIV 的改良版本作为骨架。它的主要特性是能整合到宿主细胞的基因组中，实现目标基因的稳定表达。 目标基因插入：将感兴趣的基因插入到慢病毒载体的多克隆位点（MCS）中，同时加入调控元件（如启动子和增强子）以驱动基因表达。 标记基因：为了监测感染效率，常加入荧光蛋白（如 GFP、RFP）或抗性基因（如抗嘌呤霉素基因）。 2. 包装系统...

AAV（腺相关病毒）载体是一种常用的基因治疗工具，因其低致病性、低免疫原性以及能够感染多种细胞而受到广泛关注。制备AAV载体的过程通常分为以下几个步骤： 1. 设计AAV载体骨架 目标基因插入：将目标基因插入到AAV载体的逆转录区（ITR）之间。ITR序列是AAV复制和包装的必要元件。 启动子和调控元件：选择合适的启动子（如CMV、CAG、EF1α）以驱动目标基因的表达，同时可以加入增强子或组织特异性元件。 报告基因（可选）：为了验证表达效果，可以加入报告基因（如GFP、RFP）。 质粒构建：构建含有目标基因的AAV质粒。 2....

研究背景 阿尔茨海默病（AD）一直是神经科学研究的热点，科学家们不断探索更好的模型来模拟这种复杂的神经退行性疾病，暨南大学陈功/雷文亮团队发表的一篇题为A nonhuman primate model with Alzheimer's disease-like pathology induced by hippocampal overexpression of human...

一般来说，慢病毒滴度检测通过流式细胞术染色后，样本的保存时间会影响检测结果的准确性。以下是一些需要注意的关键点： 1.细胞状态：流式细胞术依赖细胞的活性或形态特征。如果染色后的细胞已经放置较久，可能会出现细胞死亡、荧光信号减弱或背景噪音增加，从而影响检测结果。 2.荧光信号稳定性：不同荧光染料的稳定性不同。有些荧光染料在长时间存放或暴露于光线中会发生光漂白（Photobleaching）或信号衰减。如果信号显著减弱，检测的灵敏度和准确性可能受到影响。...

1.腺相关病毒(AAV)的装载容量 AAV（腺相关病毒）的装载容量主要由其基因组长度限制，约为 4.7 kb（kilobases），这是AAV病毒颗粒可以容纳的DNA总长度，包括病毒的反向末端重复序列（ITR）和目标序列。 总容量：AAV的基因组长度为4.7 kb，其中ITR序列（每端约145 bp）占据了一部分空间。因此，实际用于插入外源基因的空间大约是 4.4-4.5 kb。 超过装载容量时的情况：如果插入的外源基因长度超过4.7 kb，AAV包装过程会变得不稳定，可能导致病毒颗粒无法正常组装或产生不完整的基因组。...

腺相关病毒（Adeno-Associated Virus, AAV）的感染范围取决于其血清型和基因改造的类型。AAV是一种非致病性、非包膜病毒，能够感染多种哺乳动物细胞，但对不同的细胞类型有选择性。以下是一些主要的细胞类型和组织范围： 1. 神经系统细胞 AAV的某些血清型（如AAV9、AAV5）对神经元具有很高的亲和性。 它可以跨越血脑屏障，特别是通过系统注射的方式进入中枢神经系统。 常用于治疗神经退行性疾病（如ALS、帕金森病等）的基因治疗。 2. 肝脏细胞 AAV2、AAV8和AAV9特别容易感染肝细胞。...

AAV的ITR（Inverted Terminal Repeat，倒置末端重复序列）是腺相关病毒（Adeno-Associated Virus, AAV）基因组的关键结构元件之一。这些序列位于AAV基因组的两端（5' 和 3'），通常是145碱基对左右的高度保守结构。ITR序列在AAV病毒的复制、包装和整合过程中起着非常重要的作用。 1.ITR序列的主要功能 (1)模板功能： ITR序列在病毒DNA复制过程中起到引导作用，可以形成发夹状的结构，提供3'末端作为DNA合成的起始点。...

腺相关病毒（Adeno-Associated Virus，AAV）是一种无致病性、单链DNA病毒，常被用作基因治疗的载体。AAV感染宿主细胞的过程可以分为以下几个主要步骤： 1. 受体结合 AAV首先通过其衣壳蛋白与宿主细胞表面的特定受体结合。这种结合是特异性的，不同的AAV血清型识别不同的细胞受体。例如： AAV2 主要通过肝素硫酸蛋白聚糖（HSPG）结合细胞。 AAV9 主要与唾液酸化糖脂受体结合。 这种受体结合的特异性决定了AAV的组织靶向性。 2. 细胞内吞...