技术平台

π-Alpha™ 293 AAV 高产技术平台

作为基因治疗最安全的递送载体，AAV举足轻重，随着生物制药的爆发式发展，AAV全球产能及产量需求倍增，然而，复杂的工艺及高昂的成本，使AAV生产面临着巨大挑战，如何在安全生产的前提下，保障病毒产量的提升成了行业发展重中之重，派真生物经过长期的经验积累，在团队创新思维的驱动下，提出并实践了以下五大高产平台，助力基因治疗药物上市，促进基因治疗行业发展。

平台优势：

用独特设计的辅助RC质粒，提升293细胞体系AAV的产量可达10倍以上
生产工艺极大提升悬浮细胞产量达10~25倍
独特工艺极大减少关键杂质（HCD、内毒素等）
关键技术降低空壳率、提升感染滴度

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知识产权：

6项发明获得授权

2项发明在申请

多项核心技术未公开

高产辅助质粒（293细胞/三质粒体系）
提高AAV产量 3~8倍 (通过在RepCap质粒中加入非编码调节元件，已申请专利）

通过关键工艺参数DOE实验优化，悬浮293生产体系总产率提高10倍以上

DOE 转染条件

DOE 工程参数 Ambr 反应器（赛多利斯）

DOE 裂解和收获条件

细胞密度、质粒总量、质粒比例、转染试剂比例

搅拌速度 pH 溶氧温度

搅拌速度密度时间温度

AAV production process using serum free 293 suspension cells (200L)

总结

The pilot process development strategy and parameters for the small batches successfully guide the 200L scale-up AAV production process using serum-free 293 suspension cells.

Actual AAV production up to 7.3E+16 vg (total yield) for 200L production system

T空壳率可低<5%

分析型超高速离心AUC

降低HCD

Reducing the plasmid DNA residue (Packaged plasmid impurity) significantly by unique molecular modification on plasmid

Reducing the plasmid DNA residue (Packaged plasmid impurity) significantly by unique molecular modification on plasmid

Scalable process by ultracentrifugation allows 200~500L batch production

Characters	Descriptions
High yield	Design of RC plasmid increases AAV yield by 3-8 times
High yield	CPP optimization increases total AAV yields by 10 times
Improved scalability	Stable scale-up process: from 125 mL to 200 L (suspension)
Improved scalability	Scalable 200 L suspension process: 7.3E+16 vg yeild, >30% recovery rate
Improved biosafety	HCD residue: 30~90 ng/1E13 vg (suspension)
	Optimal full capsid ratio at harvest (20~66%) and at final (75~94%)
	Novel plasmid design decrease 90% encapsidated plasmid impurity

π-Alpha™ 293 AAV高产技术平台